本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測大鼠血清、血漿、細胞及組織勻漿中的 ROS 水平。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于氧化應(yīng)激評價、自由基損傷、衰老及炎癥氧化相關(guān)機制研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠活性氧(ROS)elisa試劑盒 | 英文名稱 | ROS ELISA Kit |
貨號 | CS-5817E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理:

固相化:微孔板預(yù)先包被 ROS 特異性捕獲抗體。
結(jié)合:加入標準品或樣本,ROS 被固相抗體捕獲。
檢測:加入化檢測抗體及 HRP 標記親和素,形成復(fù)合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。
測定:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
樣本要求:

1. 樣本類型與處理
?血清?:使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集,避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清,-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
?血漿?:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,離心后取上清。
?細胞上清?:1000×g離心10分鐘去除顆粒,-70℃保存。
?組織勻漿?:生理鹽水勻漿后離心取上清,-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3,以免抑制HRP活性。
細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導致檢測波動,建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟:
1.加樣孵育
每孔精準加入 100μL 對應(yīng)標準品 / 待測樣本,空白孔加等量樣本稀釋液;貼封板膜密封微孔板,置于 37℃恒溫孵育箱,避光孵育 90min,保證抗原抗體充分結(jié)合。
2.洗板
輕柔棄去孔內(nèi)液體,吸水紙上快速拍干;每孔加滿洗滌工作液,靜置浸泡 30s,甩干拍凈;重復(fù)洗滌5 次,去除未結(jié)合雜質(zhì),降低背景值。
3.加酶結(jié)合物孵育
除空白孔外,每孔加入 100μL HRP 標記特異性檢測抗體;輕微水平晃板混勻,重新封板,37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復(fù)上述洗板操作 5 次,嚴格拍干孔內(nèi)殘留液體,杜絕殘留洗液造成假陽性、數(shù)據(jù)偏差。
5.底物顯色
避光條件下,每孔加入 90μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻;37℃避光精準孵育 10~15min,此時液體逐步顯現(xiàn)藍色,顯色深淺與待測物含量正相關(guān)。
6.反應(yīng)終止
嚴格遵循加樣順序,每孔快速加入 50μL 酸性終止液,輕晃微孔板充分混勻,藍色即刻轉(zhuǎn)為黃色,終止酶促顯色反應(yīng)。
7.上機讀數(shù)檢測
加終止液后15min 內(nèi),用酶標儀測定各孔 450nm 波長吸光度(OD 值);以標準品濃度為橫坐標、OD 值為縱坐標繪制標準曲線,擬合方程計算待測樣本目標蛋白濃度。
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