本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專(zhuān)用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿中的 MMP-4 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于細(xì)胞外基質(zhì)降解、神經(jīng)組織重塑、腫瘤浸潤(rùn)及血管發(fā)育研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)elisa試劑盒 | 英文名稱(chēng) | MMP-4 ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-5801E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理:

固相化:微孔板預(yù)先包被抗大鼠 MMP-4 抗體。
結(jié)合:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,MMP-4 被固相抗體捕獲。
檢測(cè):加入化的抗大鼠 MMP-4 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
樣本要求:

1. 樣本類(lèi)型與處理
?血清?:使用無(wú)熱原/內(nèi)毒素試管采集,避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清,-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
?血漿?:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,離心后取上清。
?細(xì)胞上清?:1000×g離心10分鐘去除顆粒,-70℃保存。
?組織勻漿?:生理鹽水勻漿后離心取上清,-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3,以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng),建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟:

1.平衡試劑:試劑盒室溫平衡 30 min,濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣:設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔,每孔加對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本,封板溫育。
3.溫育反應(yīng):37℃孵育 30–60 min,完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板:棄液甩干,洗滌液注滿(mǎn)每孔,浸泡后拍干,重復(fù)洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物:除空白孔外,每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體,封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板:同上述洗板流程,洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。
7.顯色:每孔先后加入 A、B 顯色液,避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù):加終止液終止反應(yīng),顏色由藍(lán)變黃;立即用酶標(biāo)儀在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)測(cè)定 OD 值。
9.結(jié)果計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度、OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,換算樣本待測(cè)指標(biāo)濃度。
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