產品簡介:
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測貝類血清、淋巴液、性腺及肝胰腺組織勻漿中的 E2 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于貝類性腺成熟、生殖周期、環境雌激素暴露及繁殖內分泌研究。
產品名稱:貝類雌二醇(E2)ELISA檢測試劑盒
英文名稱:E2 ELISA Kit
產品規格:48T/96T
貨號:CS-SM9563
檢測原理:
貝類雌二醇ELISA檢測試劑盒的原理是雙抗體夾心法,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標記的檢測抗體進行識別,最后通過底物顯色反應來定量檢測。
固相化:微孔板預先包被抗貝類 E2 抗體。
結合:加入標準品或樣本,E2 被固相抗體捕獲。
檢測:加入化的抗貝類 E2 抗體和 HRP 標記親和素,形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化由藍色變為黃色。
測定:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
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實驗步驟?:
1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫(20–25℃,≥30min);濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復溶,梯度稀釋,配置系列濃度梯度標準溶液,備用。
2. 實驗流程
加樣:設置空白孔、標準孔、樣本孔,每孔加入 100 μL 對應標準品 / 待測樣本,封板,37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌:棄凈孔內液體,每孔加滿洗滌工作液,靜置 30 s,甩干拍凈,重復洗滌 5 次。
加酶結合物:每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體,封板混勻,37℃孵育 60 min。
洗滌:重復上述洗滌步驟 5 次,拍干微孔。
顯色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻,37℃避光顯色 15 min。
終止:按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液,輕晃混勻,溶液由藍轉黃。
讀數:15 min 內,酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值,擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關鍵質控要點
全程孵育使用專用封板膜,防止液體蒸發、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心,殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存,現用現加,嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致,避免局部色差、綠色殘留。