產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用速率法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、肝組織勻漿中的 αL 巖藻糖苷酶（AFU）活性。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 U/L，靈敏度達(dá) 0.16 U/L，適用于肝癌篩查、肝功能檢測(cè)、溶酶體功能及遺傳性代謝病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)elisa試劑盒
英文名稱：AFU ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào)：CS-6139E
檢測(cè)原理：
大鼠 αL 巖藻糖苷酶 (AFU) ELISA 試劑盒的原理是速率法，通過 AFU 催化巖藻糖苷底物的水解反應(yīng)，生成的產(chǎn)物與顯色劑作用，利用吸光度變化速率定量檢測(cè)酶活性。
固相化：微孔板預(yù)先包被 AFU 特異性顯色底物。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，AFU 催化底物水解生成顯色產(chǎn)物。
檢測(cè)：直接檢測(cè)產(chǎn)物的吸光度變化，無需額外二抗孵育。
顯色：產(chǎn)物隨酶促反應(yīng)持續(xù)生成，顏色深淺與 AFU 活性相關(guān)。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)連續(xù)測(cè)定吸光度變化速率，活性與速率值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
?1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。
2.設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔，精準(zhǔn)加樣后封板。
3.37℃恒溫孵育結(jié)合反應(yīng)，結(jié)束后棄孔內(nèi)液體拍干。
4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復(fù)洗板 3–5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)。
5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結(jié)合物，再次 37℃溫育。
6.重復(fù)洗板流程洗凈游離酶標(biāo)抗體，保證背景干凈。
7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍(lán)色清晰顯現(xiàn)。
8.加入終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃，即刻用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。
9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計(jì)算，得出樣本目標(biāo)物質(zhì)濃度。
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